Методы диагностики лейкоза КРС

hj.jpg

Николай ДВОЕГЛАЗОВ, канд. вет. наук, старший научный сотрудник лаборатории лейкоза ИЭВСиДВ СФНЦА РАН


Прежде всего, напомним, что лейкоз КРС относится к так называемым медленным инфекциям. Группа данных заболеваний имеет ряд характерных проявлений: необычно продолжительный инкубационный период (годы), медленно прогрессирующий характер течения процесса, необычность поражения органов и тканей и неизбежный летальный исход.

При лейкозе выделяют несколько стадий развития болезни. Для каждой из них разработаны свои методы диагностики, которые, с одной стороны, позволяют определить конкретную стадию у животного, с другой – говорить о том, что обнаруженные изменения относятся именно к лейкозу КРС. Если смотреть от момента инфицирования, то выделяют следующие стадии: инкубационную, гематологическую и опухолевую (или терминальную).
Методы диагностики бывают: прижизненные и посмертные. К прижизненным относятся клинический, гематологический, серологический и генно­молекулярный. При падеже или вынужденном убое у животных могут находить характерные для лейкоза изменения при помощи патоморфологических и гистологических исследований.
Начнем рассмотрение методов в хронологическом порядке – по мере того, как они возникали. О болезни узнали (первые случаи регистрировали еще в конце 19 века) потому, что на фермах крупного рогатого скота начал происходить падеж, а в тушах находили изменения внутренних органов и тканей (патоморфологический метод). При попытках понять причины падежа отметили, что до смерти у таких животных внешне есть некоторые отклонения от нормального состояния: увеличенные лимфоузлы, экзофтальм, сильное исхудание и др. (клинический метод). В течение 70 лет исследователи могли регистрировать только подобные проявления болезни, не понимая их причины. Значительно позже, в середине прошлого столетия, обнаружили взаимосвязь между клиническими признаками и изменениями в крови. При лейкозе они имели свою специфику, позволяющую отличать данное заболевание от других патологических состояний инфекционной и незаразной природы (гематологический метод). Спустя еще пару десятилетий, после установления вирусной природы лейкоза и обнаружения противовирусных антител, были разработаны первые методы, которые позволяли выявлять инфицированных животных до появления каких­либо видимых проявлений болезни (серологические методы). А также методы, позволявшие обнаруживать непосредственно сам вирус, – генно­молекулярные, такие как полимеразная цепная реакция (ПЦР).
Далее раскроем суть методов подробнее.

ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД
При вскрытии трупов или послеубойном осмотре туш и органов животных обращают внимание на величину пораженных органов, распространенность опухолевых разрастаний, их связь с кроветворными или лимфоидными (костный мозг, лимфатические узлы, селезенка), а также другими органами и тканями.
В зависимости от степени распространения опухолевых разрастаний в организме лейкозы подразделяются на системные и опухолевые. При системных лейкозах поражаются одновременно все органы гемо­ и лимфопоэза (лимфатические узлы, селезенка, костный мозг). При опухолевых характерна изначальная очаговость поражения лимфоидной ткани, и в первую очередь лимфатических узлов.
Наиболее распространенными формами лейкоза у крупного рогатого скота являются лимфоидный лейкоз и лимфосаркома, реже встречается лимфогранулематоз и очень редко остальные формы болезни.
При лимфоидном лейкозе у животных в 100 % случаев в опухолевой процесс вовлечена селезенка. Капсула ее обычно напряжена, фолликулы гиперплазированы. В селезенке и лимфатических узлах наблюдаются стирания рисунка за счет диффузной пролиферации лимфоидных клеток различной степени дифференциации. Лимфатические узлы в той или иной степени увеличены. На разрезе поверхность саловидная, серо­белого цвета, часто с очагами кровоизлияний и некроза.
При опухолевых формах лейкоза селезенка и костный мозг остаются обычно без изменений. Лимфатические узлы часто имеют асимметричное увеличение. Капсула шероховатая, сросшаяся с соседними органами и тканями. Поверхность разреза серо­белого, серо­желтого цвета, часто с обширными очагами кровоизлияния и некроза. Постоянно выявляют плотные опухолевые образования различной величины и формы, которые образуют иногда большие конгломераты.
При неклассифицируемом лейкозе регистрируются новообразования в тазовой полости.
В остальных органах и тканях (печени, почках, органах пищеварения, матке, скелетной мускулатуре), которые вовлекаются в опухолевой процесс на поздних стадиях развития заболевания, отмечают диффузные или очаговые серо­белые разрастания различной формы и величины.

ГИСТОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД
Суть его в том, что в кусочках органов и тканей больного животного обнаруживают характерные для лейкозного процесса изменения в виде диффузных или очаговых разрастаний из размножающихся, нарушивших нормальное созревание и дифференцировку, кроветворных клеток. При разных формах лейкоза также дополнительно обнаруживают ряд специфичных для них признаков, позволяющих проводить дифференциацию.

КЛИНИЧЕСКИЙ МЕТОД
Симптомокомплекс при лейкозе крупного рогатого скота обусловлен функциональными нарушениями и морфологическими изменениями в органах и тканях и зависит от опухолевого поражения той или иной системы органов, а полнота их проявления – от стадии течения лейкозного процесса. В предлейкозном состоянии и в начальной стадии болезни клинические симптомы обычно отсутствуют, сохраняются продуктивность и воспроизводительная функция животного. Первые клинические признаки появляются в развернутой стадии лейкоза и прогрессируют по мере его развития. Переход гематологической (субклинической) стадии в клиническую часто происходит после отела, при интоксикации, вторичной инфекции, на фоне стрессовых воздействий.
Помимо органов кроветворения, часто в патологический процесс вовлекаются другие внутренние органы, не имеющие непосредственного отношения к кроветворению. Поэтому в клинических симптомах можно выделить специфические, характеризующие лейкоз, и неспецифические, отображающие функциональное нарушение той или иной системы органов вследствие их опухолевых поражений.
Неспецифические симптомы представляют собой расстройства общего характера, которые могут наблюдаться при многих болезнях. Чаще всего они выражаются в ухудшении общего состояния животного, плохом усвоении кормов, отсутствии аппетита, снижении удоя, быстрой утомляемости, недомогании и прогрессирующем исхудании. При поражении желудочно­кишечного тракта наблюдается расстройства пищеварения, ослабление сердечной деятельности, цианоз и желтушность слизистых оболочек, нарушение дыхания, отеки в области подгрудка, живота, вымени и подчелюстного пространства.
При сдавливании нервных стволов конечностей или прорастании лейкозной опухоли в спинномозговой канал отмечается хромота на одну или обе задние конечности и слабость, животное с трудом встает или вообще не поднимается.
Поражение мочевого пузыря или преддверия влагалища сопровождается затруднением выделения мочи, а поражение матки – абортом и яловостью.
Характерные симптомы выражаются в увеличении поверхностных (предлопаточных, околоушных, подчелюстных, надколенных, надвыменных и др.) и доступных ректальному исследованию внутренних лимфатических узлов, селезенки и печени, в появлении опухолевых разрастаний в различных частях тела, органах и орбитах глаз. Последние обусловливают нередко экзофтальмию (пучеглазие) с нагноением глазного яблока. Довольно часто наблюдается последовательное поражение лимфатических узлов, поэтому размеры их варьируют от грецкого ореха до детской головы.
При лейкозе нередко обнаруживают узлы, которые в норме не прощупываются (околоушные, дополнительные надвыменные, шейные и отдельные подкожные, расположенные в различных частях тела). В области голодной ямки, на грудной клетке, в подгрудке, на ребрах, лопатке обнаруживают мелкие, размером до голубиного яйца подкожные лимфоузлы.
К специфическим клиническим симптомам относится и увеличение селезенки, границы которой легко установить при перкуссии. Степень поражения селезенки зависит от формы болезни. При лимфолейкозе селезенка может быть увеличена в несколько раз и достигать массы 25 кг. Сильное увеличение селезенки сопровождается высоким лимфоцитозом в периферической крови, иногда наблюдают разрыв капсулы и внезапную смерть животного от внутреннего кровотечения.
Клиническую стадию лейкоза часто обнаруживают зимой, в конце стельности и в начале лактации. Это объясняется снижением резистентности организма.
Лейкоз у крупного рогатого скота протекает в большинстве случаев хронически. Острое и подострое течение болезни наблюдается лишь в 5­10 % случаев. Поэтому удельный вес клинических симптомов в диагностике лейкозов невелик.
Наряду с энзоотическим лейкозом крупного рогатого скота имеет место и лейкоз молодняка с нередким опухолевым поражением зобной железы. При этом наблюдают затрудненное дыхание, хрипы и слизистое истечение из носовой полости. Диагноз ставят по увеличенным лимфоузлам.
В редких случаях лейкоз может протекать в кожной форме. На теле животного появляются узелковые припухлости по 2,5 см в диаметре, хорошо заметные на шее, спине, крестце и бедрах. Через несколько месяцев происходит инфильтративное поражение внутренних органов, и животное погибает.
Таким образом, характерные клинические признаки, а также опухолевые поражения органов брюшной и тазовой полостей, устанавливаемые ректальным исследованием, являются достоверными диагностическими признаками лейкоза. Неспецифические симптомы, отражающие опухолевые поражения внутренних органов, только в сочетании с показателями крови приобретают диагностическое значение.

ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД
Этот метод является одним из основных, позволяющих достоверно поставить прижизненный диагноз на лейкоз. Метод заключается в подсчете количества лейкоцитов в единице объема крови и качественной оценке лимфоидных элементов – лимфоцитов. Изменения оцениваются по лейкозному ключу, составленному с учетом возраста животных. В крови отмечают резкое увеличение уровня лейкоцитов, преимущественно за счет лимфоцитов.
Необходимо отметить, что гематологическому исследованию подвергаются только животные, в сыворотке крови которых серологическим методом обнаружены специфические антитела к ВЛКРС.
Животных, находящихся в гематологической стадии лейкоза, часто называют больными или гембольными. Таким образом, проводя различие между инфицированными животными с изменениями в крови и без них. Однако подобное разделение более чем условно, потому что и те, и другие являются носителями вируса и никогда от него не освободятся (на данном этапе развития ветеринарной науки) и при этом выступают источниками инфекции для здоровых животных. Следовательно, нахождение таких животных в стаде несет постоянную угрозу для свободных от вируса животных.

СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
Методы основаны на выявлении в сыворотке крови животных при помощи специальных компонентов тест­систем антител к антигенам вируса лейкоза. Специфические антитела появляются в крови через 1­2 мес. после заражения животного вирусом лейкоза и сохраняются пожизненно.
Существует два основных серологических метода – реакция иммунодиффузии или диффузной преципитации в геле агара (РИД, РДП) и иммуноферментный анализ (ИФА).
Серологическому исследованию на лейкоз подвергают животных в возрасте от 6 месяцев и старше. Пробы крови для исследований берут не ранее чем через 30 суток после введения животным вакцин и аллергенов, у стельных животных – за 30 суток до отела или через 30 после него.
Данные методы обладают высокой специфичностью и достаточной чувствительностью, для того чтобы производить объективную оценку эпизоотической ситуации по лейкозной инфекции, а также осуществлять с их помощью оздоровительную работу на сельхозпредприятиях.
ИФА по отношению к РИД имеет ряд преимуществ: является более высокочувствительным, что позволяет с его помощью выявлять большее число инфицированных животных (дополнительно к РИД может выявлять животных с низким содержанием антител в крови); в ИФА можно наряду с сывороткой крови исследовать молоко, молозиво или сухостойный секрет; может быть автоматизирован; вся постановка занимает несколько часов в отличие от 3 дней, требующихся для проведения РИД.

ГЕННО­МОЛЕКУЛЯРНЫЙ МЕТОД
ПЦР представляет собой метод, проходящий in vitro, при котором происходит экспоненциальное увеличение специфического фрагмента последовательности ДНК. ПЦР позволяет обнаруживать геном как вируса (РНК), так и провирусной ДНК (встроенной в геном клеток хозяина) на самых ранних стадиях инфицирования, еще до появления в организме первых специфических противовирусных антител. Первые ПЦР исследования, направленные на выявление ВЛКРС­провируса у крупного рогатого скота, провели H.M. Naif et al. в 1990 году. Также метод позволяет выявлять животных с низкими, для выявления серологическими методами, титрами антител и у толерантных животных – такие животные появляются при внутриутробном заражении плода в первый триместр стельности, они являются вирусоносителями и источником болезни, но сами не вырабатывают антител против вируса лейкоза (ВЛКРС).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ
На современном этапе борьбы с лейкозом для диагностики заболевания широко применяются серологический и гематологический методы. В отдельных регионах применяют ПЦР. И только повсеместное использование методов ранней диагностики позволяет избегать встречи с клиническими и патоморфологическими проявлениями данного заболевания, которые еще каких­то 50–60 лет назад можно было увидеть довольно часто. Использование только гематологического метода не позволяет осуществлять оздоровительную работу в стаде, т.к. он служит исключительно для выявления животных повышенного риска перехода в опухолевую стадию. Поэтому эффективная борьба с лейкозом должна строиться на своевременной серологической и молекулярной диагностике с разделением стада на группы здоровых и инфицированных особей, с постепенной элиминацией последних.

"Сельская Сибирь" №6 (14) 2019

Читайте также

Предложить
новость
Если вы стали свидетелем или
участником интересных событий
Предложить
Подписка на
рассылку новостей
Каждую неделю только самые
важные и интересные новости
Подписаться
Подписка
на журнал
Оформите подписку на
выпуск новых журналов
Оформить

Новостная рассылка

Каждую неделю только самые важные и интересные новости